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多少同學(xué)能將 RT-PCR、Realtime-PCR、QPCR 區(qū)分開？有多少同學(xué)還在犯暈？

今兒師兄就帶你區(qū)分區(qū)分，撥開那扇 PCR 迷霧。

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什么是 RT-PCR？

RT-PCR 就是逆轉(zhuǎn)錄 PCR（reverse transcription PCR）或者稱反轉(zhuǎn)錄 PCR（reverse transcription-PCR, RT-PCR），是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）的一種廣泛應(yīng)用的變形。在 RT-PCR 中，一條 RNA 鏈被逆轉(zhuǎn)錄成為互補(bǔ) DNA，再以此為模板通過 PCR 進(jìn)行 DNA 擴(kuò)增。

那什么是 qPCR、Real-time-PCR？

其實(shí) Rea-time-PCR 和 qPCR（Quantitative Rea-time-PCR）是一碼事，都是實(shí)時(shí)定量 PCR，指的是 PCR 過程中每個(gè)循環(huán)都有數(shù)據(jù)的實(shí)時(shí)記錄，因此可以對(duì)起始模板數(shù)量進(jìn)行精確的分析。

雖然 Real-time PCR（實(shí)時(shí)熒光定量 PCR）和 Reverse transcription PCR（反轉(zhuǎn)錄 PCR）看起來都可以縮寫為 RT-PCR，但是，國(guó)際上的約定俗成的是：RT-PCR 特指反轉(zhuǎn)錄 PCR，而 Real-time PCR 一般縮寫為 qPCR（quantitative real-time PCR）。

那什么是 real-time RT-PCR（或 RT-qPCR）？

real-time RT-PCR 中間的「RT」是 reverse transcription（逆轉(zhuǎn)錄），整個(gè)意思就是利用 mRNA 或 總 RNA 為模板的實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄 PCR 技術(shù)（quantitative Real-time RT-PCR）。real time RT-PCR 指的是 qPCR+RT-PCR 的組合，是說將 mRNA 逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA 后再作為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光 PCR 分析，因?yàn)?RT-PCR 是可以定性的，但不能進(jìn)行定量檢測(cè)的。

所以不難理解 real-time RT-PCR（RT-qPCR）就是結(jié)合了熒光定量技術(shù)的反轉(zhuǎn)錄 PCR：先從 RNA 反轉(zhuǎn)錄得到 cDNA（RT），然后再用 Real-time PCR 進(jìn)行定量分析（qPCR）。

所以，實(shí)時(shí)熒光定量 PCR，它不僅可以用 cDNA 作為模板，也可以用基因組 DNA 等作為模板。

有時(shí)候搞清楚這些概念也很重要，你分清了嗎？

作者：大師兄
鏈接：http://paper.dxy.cn/article/510973?keywords=PCR
來源：丁香園

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