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多少同學(xué)能將 RT-PCR、Realtime-PCR、QPCR 區(qū)分開(kāi)?有多少同學(xué)還在犯暈?
今兒師兄就帶你區(qū)分區(qū)分,撥開(kāi)那扇 PCR 迷霧。
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什么是 RT-PCR?
RT-PCR 就是逆轉(zhuǎn)錄 PCR(reverse transcription PCR)或者稱(chēng)反轉(zhuǎn)錄 PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的一種廣泛應(yīng)用的變形。在 RT-PCR 中,一條 RNA 鏈被逆轉(zhuǎn)錄成為互補(bǔ) DNA,再以此為模板通過(guò) PCR 進(jìn)行 DNA 擴(kuò)增。
那什么是 qPCR、Real-time-PCR?
其實(shí) Rea-time-PCR 和 qPCR(Quantitative Rea-time-PCR)是一碼事,都是實(shí)時(shí)定量 PCR,指的是 PCR 過(guò)程中每個(gè)循環(huán)都有數(shù)據(jù)的實(shí)時(shí)記錄,因此可以對(duì)起始模板數(shù)量進(jìn)行精確的分析。
雖然 Real-time PCR(實(shí)時(shí)熒光定量 PCR)和 Reverse transcription PCR(反轉(zhuǎn)錄 PCR)看起來(lái)都可以縮寫(xiě)為 RT-PCR,但是,國(guó)際上的約定俗成的是:RT-PCR 特指反轉(zhuǎn)錄 PCR,而 Real-time PCR 一般縮寫(xiě)為 qPCR(quantitative real-time PCR)。
那什么是 real-time RT-PCR(或 RT-qPCR)?
real-time RT-PCR 中間的「RT」是 reverse transcription(逆轉(zhuǎn)錄),整個(gè)意思就是利用 mRNA 或 總 RNA 為模板的實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄 PCR 技術(shù)(quantitative Real-time RT-PCR)。real time RT-PCR 指的是 qPCR+RT-PCR 的組合,是說(shuō)將 mRNA 逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA 后再作為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光 PCR 分析,因?yàn)?RT-PCR 是可以定性的,但不能進(jìn)行定量檢測(cè)的。
所以不難理解 real-time RT-PCR(RT-qPCR)就是結(jié)合了熒光定量技術(shù)的反轉(zhuǎn)錄 PCR:先從 RNA 反轉(zhuǎn)錄得到 cDNA(RT),然后再用 Real-time PCR 進(jìn)行定量分析(qPCR)。
所以,實(shí)時(shí)熒光定量 PCR,它不僅可以用 cDNA 作為模板,也可以用基因組 DNA 等作為模板。
有時(shí)候搞清楚這些概念也很重要,你分清了嗎?
作者:大師兄
鏈接:http://paper.dxy.cn/article/510973?keywords=PCR
來(lái)源:丁香園
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