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干細胞治療致盲性眼病有了新希望

日期: 2019-08-01
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第二看臺

老年性黃斑變性(AMD)、視網(wǎng)膜色素變性(RP)等視網(wǎng)膜變性疾病是目前尚無有效治療手段的兇險致盲性眼病,也是公認的 “視力殺手”。由中南大學愛爾眼科學院院長唐仕波教授、愛爾眼科研究所副所長陳建蘇教授帶領團隊,利用誘導多能干細胞(iPS)條件培養(yǎng)基和飛秒角膜透鏡,聯(lián)合構建高活性視網(wǎng)膜色素上皮細胞(RPE)的研究,不但有利于對視網(wǎng)膜色素上皮細胞生理特性、藥物篩選等研究,還有利于構建組織工程視網(wǎng)膜層及其移植。這將幫助科學家開發(fā)出應用組織工程 RPE 細胞片治療視網(wǎng)膜變性疾病和光感受器病變的新方法。

培養(yǎng)高活性的視網(wǎng)膜細胞

與年齡相關的老年性黃斑變性是發(fā)達國家 50 歲以上人群視力損害和致盲的首要病因,多達 90% 的病人無法治愈。數(shù)據(jù)顯示,發(fā)達國家年齡 50 歲以上黃斑變性的發(fā)病率達 11%,目前我國的發(fā)病率接近發(fā)達國家,患病人數(shù)超過 3000 萬人,并以每年 30 萬人次的速度增加,成為我國現(xiàn)階段 50 歲以上年齡群體發(fā)病率最高的三大眼科疾病之一,而且女性呈現(xiàn)出比男性更高的危險性。

研究發(fā)現(xiàn),未來最有希望治療老年性黃斑變性的方式是視網(wǎng)膜色素上皮細胞療法、視網(wǎng)膜黃斑部分的移植。那么,要采用 RPE 療法,就需要先培養(yǎng)健康的視網(wǎng)膜細胞。

陳建蘇告訴科技日報記者,取出死亡時間在 3 小時內捐獻者的帶有部分脈絡膜的視網(wǎng)膜組織,在解剖顯微鏡下可將帶有部分脈絡膜的 RPE 層從捐贈組織中分離出來,并培養(yǎng)出 RPE 細胞。“本研究通過半定量蛋白芯片分析鑒定,發(fā)現(xiàn)了包括血小板衍生生長因子 AA(PDGF-AA)、胰島素樣生長因子結合蛋白 2(IGFBP-2)等因子,在誘導多能干細胞上清液中,含量顯著增高,從而獲得大量增殖能力強、高活性及具有良好功能的 RPE 細胞?!?/span>

獲得類似視網(wǎng)膜自然結構的片狀組織

正常眼內的 RPE 細胞,是緊密連接的單層細胞,只有移植單層 RPE 細胞才有可能提高其存活率并發(fā)揮功能。基于這個原因,研究團隊開始利用組織工程的方式,嘗試體外構建具有功能的 RPE 細胞片。

基因整合是指把兩個非同源基因連接起來。愛爾眼科團隊針對視網(wǎng)膜變性疾病展開進一步的研究,從患者的尿液、血液提取體細胞,進行體外擴增培養(yǎng),并通過非基因整合型的方式進行重編程轉化,將患者的尿液、血液來源的細胞逆轉為具有自我復制及分化能力的誘導多能干細胞。

“通過研究,對轉化成功的尿液、血液來源的誘導多能干細胞,進行傳代純化并通過多能性基因表達、干性蛋白標志物免疫熒光及體外擬胚體試驗等方法進行鑒定,確認產生的誘導多能干細胞具有多向分化的能力?!?愛爾眼科學院助理研究員顧佳寧說,后續(xù)通過 3D 分化培養(yǎng)方式,用不同的培養(yǎng)基對誘導多能干細胞進行視網(wǎng)膜方向的定向誘導分化,獲得視網(wǎng)膜器官發(fā)育的類似組織。并對其中出現(xiàn)色素表達的細胞,進行分離培養(yǎng),得到 RPE 細胞,通過培養(yǎng)形成一層超薄的類似視網(wǎng)膜自然結構的片狀組織。

“但目前尿液及血液細胞的各種重編程方法效率均不高,往往要觀察半個月以上,才能確定是否重編程成功。因此,獲得患者體細胞來源的 iPS 細胞并不容易?!?陳建蘇解釋說,對 iPS 細胞的誘導分化存在多種影響因素,如初始細胞的密度及 iPS 細胞狀態(tài)等。因此,通過 iPS 細胞誘導分化得到的 RPE 細胞色素表達情況不穩(wěn)定,還需進一步控制各個變量,獲得穩(wěn)定分化成優(yōu)質 RPE 細胞的誘導方法。

變角膜透鏡為支架材料

一個成功的 RPE 細胞片應具備三要素,即種子細胞、培養(yǎng)系統(tǒng)和支架材料。除了高活性的種子細胞外,支架材料可有效保證細胞的黏附性,以及在移植時可確保細胞以正確的方向面對光感受器細胞。于是,研究團隊把全飛秒激光近視手術中切下取出的角膜基質透鏡 “變廢為寶”,提高了其再利用價值。研究發(fā)現(xiàn),當 RPE 細胞接種在角膜基質透鏡上,并應用誘導多能干細胞條件培養(yǎng)液培養(yǎng),可以使 RPE 細胞片具有更多的干細胞特性、完善的纖毛組裝以及成熟功能。

此外,團隊還采用 3D 細胞培養(yǎng)、類器官等新技術,建立眼遺傳病患者疾病細胞模型,探明眼病發(fā)病和發(fā)展的機制及規(guī)律?;诎l(fā)病機理分析,對現(xiàn)有藥物做出個體化評估,以及發(fā)現(xiàn)新的治療靶點和篩選新藥物,獲得眼遺傳病及其他眼病新的治療方案。

“幾十年來,干細胞一直有望治愈疑難雜癥。該項研究將加速推動更安全的誘導多能干細胞療法的發(fā)展,同時,實驗已經證明了該項技術的安全性、有效性,為進行人體臨床試驗提供了充足依據(jù)?!?唐仕波說。


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